서 언
농업 현장에서 농약의 사용은 노동력 감소, 농작물 보호 및 생산량 증대와 더불어 고품질 농산물 생산의 필수적 요소이므 로, 농약 사용에 따른 농식품의 안전성 확보는 매우 중요한 과 제일 것이다(Park et al., 2011). 최근 Free Trade Agreement (FTA) 체결로 인해 농산물의 수·출입이 활발하게 이루어지고 있으나, 농약 잔류허용기준이 설정 되지 않은 농산물이 수·출 입 될 경우, 부적합 농산물이 양산되어 국민들을 불안하게 할 수 있을 것이므로 국내 생산 농식품에 함유된 농약 및 수입 식품에 함유된 농약에 대해서도 국민적 관심이 증대되고 있는 실정이다(Lee et al., 2011 a). 국내 미등록 농약이나, 아직 국 내 분석법이 확립되지 않은 특정 농약에 대해서는 수입 농식 품에 대상 농약이 잔류하여도 잔류농약 검사에서 대상 성분이 검출되지 않을 수 있으므로 국내에서는 등록되지 않은 농약이 지만 국외에서의 사용빈도가 높은 농약일 경우 국내 실정에 맞 는 분석체계를 확립하여 수입 농식품의 안전성 확보를 기하는 것이 중요할 것이다(Lee et al., 2010).
국내 미등록 triazine계 제초제 cyanazine은 옥수수, 목화, 수수, 가을밀 및 휴한작물 등의 광엽잡초를 제거하는 데 사용 되며(Lynch et al., 2006), 중국의 경우 옥수수 등을 포함한 다양한 밭작물에 사용하고, Maximum Residue Limit (MRL) 은 0.05 mg/kg 수준이며(Meador & Jie, 2014), 뉴질랜드의 경우 콩, 완두콩, 양파, 감자 및 옥수수 등 다양한 작물에 사용 하며, MRL은 0.01~0.02 mg/kg 수준이다(NewZealand Food Safety Authority, 2007).
Cyanazine의 물리화학적 특성 및 화학구조를 표 1에 나타내 었으며 무색, 무취의 결정체로, 다양한 유기용매와 물에도 모 두 잘 용해되는 특성을 나타낸다(WHO, 2003).
Triazine계 농약은 분자 구조 내 triazine ring과 염소기를 포함하는 경우가 많으므로 gas chromatography/nitrogen phosphorous detector (GC/NPD) 혹은 gas chromatography/ electron capture detector (GC/ECD)를 주로 사용하고, 최근에 는 수백종의 농약을 동시에 분석하기 위해 gas chromatography/ mass spectrometry (GC/MS) 방법을 적용하기도 한다.
한편, cyanazine은 증기압이 2.1 × 10-4mPa를 나타내어 휘발 성이 극히 낮고, 아울러 triazine ring에 결합된 염소 원자의 취약성, amino기의 해리성 등으로 인하여 GC 분석 중 흡착 및 열분해 현상이 일어나므로 재현성이 불량하다. 또한, Log Pow 값이 2.2로 극성이 다소 높은 편이므로 GLC 분석 중 backward tailing 현상이 발생할 수 있고, 검체 주입 시 마다 peak의 재현성도 불량할 가능성이 많다. 따라서 분리용 column을 충분히 conditioning하고 표준 용액을 검체용액과 교 대로 주입, 보정하여야 최상의 분석 재현성을 얻을 수 있다 (Lee, 2017).
국외에서 보고된 cyanazine의 분석법의 경우 분자구조 내에 함유되어 있는 amino기의 해리성과 낮은 휘발성으로 인해 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) (Sănchez- Razero & Dios, 1988;Hogendoorn & Goewie, 1989) 혹은 분광광도계를 이용한 비색 분석법이 보고된 바 있고(Zhang & Pan, 2011), 국내의 경우 식품공전 7.1.2.2법인 다종농약 다성 분 분석법 제2법에서 GC-ECD 및 MS/MS 분석법을 기재하 고 있다(Ministry of Food and Drug Safety, 2017). 그러나 이 분석법은 cyanazine의 물리화학적 특성을 고려할 때 최적 화된 분석법으로 보기 어려우며, 아울러 다종농약 다성분 분 석법의 경우 농약 살포내역이 불분명한 미지 식품검체에 대하 여 잔류농약의 함유 여부를 검색 (screening) 할 목적으로 사 용되는 분석법이다. 다종농약 다성분 분석법은 분석조작 1회 당 검색이 가능한 농약수가 수백종으로 분석효율은 매우 높으 나 각각의 성분에 대한 정밀도나 신뢰성은 열등하다. 즉 다종 농약 다성분 분석법에서는 대상성분들을 물리화학적 특성 범 위별로 크게 그룹핑하고 그룹별로 검체 추출, 정제 및 기기분 석과정에 의하여 검체 분석을 수행하므로 1개 분석 대상 성분 마다 최적의 분석법을 적용하는 것이 불가능하다. 따라서 각 대상성분의 특성에 최적화된 검체 추출, 정제 및 기기분석조 건이 적용 되는 개별 분석법에 비하여 분석 감도, 정밀성 및 신뢰도가 극히 떨어지는 양상을 보인다. 또한 정제과정이 특 화되어 있지 않아 간섭물질의 제거범위가 개별 분석법에 비하 여 좁으므로 검체의 종류별로 혼입되는 간섭물질의 종류 및 양이 크게 변화할 수 있다. 즉, 검체 종류별로 분석 성분들에 대하여 간섭 정도가 상이하므로 크로마토그래피적 머무름 특 성만을 이용하여 확인된 분석 성분의 정성적 확률이 열등하 다. 따라서 다종농약 다성분 분석법에 의하여 검출된 성분에 대해서는 반드시 재확인과정을 수행하여야 할 것이다. 특히 허 용기준 등에 근접한 잔류량을 나타내어 실험적 오차 등이 법 적 판정에 영향을 미치는 경우에는, 동일 검체에 대하여 검출 된 성분에 특화된 개별 분석법을 재적용, 추가 분석함으로써 분석결과의 정밀성을 입증하여야 한다(Lee, 2017).
또한, 현재 보고된 대부분의 선행 연구결과들은 모두 분석 대상이 토양 혹은 지하수에 대한 잔류성 및 오염도를 평가하 기 위해 이루어진 실험의 결과들이며, 실제 농산물을 대상으 로 한 분석조건 확립 및 회수율 등이 검토된 결과는 극히 미 비한 실정이다. 따라서 본 연구는 국내 미등록 농약이지만 중 국과 뉴질랜드 등 국외에서 광엽잡초의 제초를 목적으로 사용 되고 있는 triazine계 제초제 cyanazine에 대해 정확성 및 정 밀성이 확보되고, 농산물에 적용 가능한 신규 단성분 분석체 계를 검토하여 국내외 식품 검역 및 재배 작물의 잔류농약 검 사를 위한 기초 자료를 제공하고자 한다.
재료 및 방법
시약 및 기구
Cyanazine의 분석용 표준품은 순도 98.0% 이상인 Sigmaaldrich (St. Louis, MO, USA)제품을 구입하여 사용하였다. 표준품의 stock solution은 methanol에 용해하여 500 mg/L의 농도가 되도록 조제하여 -20°C의 냉동고에서 보관하였으며, 필 요 시 methanol로 희석하여 사용하였다. 정제에 사용된 흡착 크로마토그라피용 florisil (60~100 mesh)은 J. T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA)사로부터 구입하였고, 130oC에서 12시 간 이상 연속 가열 후 활성화된 상태에서 사용하였다. 또한 분석에 사용된 유기용매로서 n-hexane, dichloromethane, acetone, methanol, acetonitrile 및 ethyl acetate는 잔류분석용 을, deionized water는 HPLC용을 J. T. Baker (Phillipsburg, NJ, USA)에서 구입하였다. 기타 유기용매 및 무기시약은 시 약특급 혹은 잔류분석용을 구입하여 사용하였다. 각종 분석용 매의 감압농축에는 회전증발 농축기(Eyela NE-1000SW, Tokyo, Japan)를 사용하였고, 시료의 마쇄 및 균질화는 고속 호모게나이저(IKA, Ultra-Turrax T-25, Wilmington, NC, USA)를 이용하였다.
주요 농산물 시료
본 연구에 사용된 주요 농산물은 곡류 중 현미, 두류는 콩, 채소류는 고추 및 배추, 과일류에서는 사과를 선정하였다. 각 농산물의 무농약 시료는 지역 대형마트에서 유기농 인증시료 를 구입한 후 식품공전 상 검체 처리방법(Ministry of Food and Drug Safety, 2017)에 따라 전처리하여 사용하였다. 대조 시료는 자체적으로 대상농약에 대해 잔류검사를 실시하여 무 농약 시료임을 검증한 후 사용하였다. Table 1
HPLC-DAD/MS 분석
Cyanazine은 구조적으로 결합된 amino기로 인해 Gas chromatography (GC) 분석 시 열분해가 발생할 수 있어 분리 능이 열악해질 수 있으므로(Hwang et al., 2016), 본 연구에 서도 HPLC/DAD 분석법을 적용하였다. HPLC는 Agilent (Wilmington, DE, USA) 1200 series를 이용하였고, 분리용 칼럼은 YMC-Pack Pro C18 RS(4.6 × 250 mm, 5 μm, Waters, Milford, MA, USA)를 사용하였으며, 잔류분 재확인용 liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS)는 Agilent (Wilmington, DE, USA) 6110 모델을 사용하였다(Table 2 및 3).
검량선, 재현성 및 정량한계(Limit of quantitation, LOQ)
Cyanazine 표준용액 0.05~5.0 mg/L를 각 20 μL씩 HPLCDAD에 주입 분석하여 계산된 peak 면적을 기준으로 표준용 액의 검량선을 작성하였다. 또한, 분석기기의 재현성 (reproducibility)을 검증하기 위해 0.5 mg/L의 cyanazine 표준 용액을 HPLC-DAD에 10회 연속 주입, 크로마토그램 상의 retention time(tR) 및 peak area 등의 변이를 비교 평가하였다.
분석 정량한계는 대조 농산물 시료에서 간섭물질이 존재하 지 않음을 확인하고, 분석기기의 정량한계, 시료 주입량, 시료 사용량 및 최종 회수된 시료 용액의 양을 계산하여 아래의 계 산식에 의해 산출하였으며(Lee et al., 2011 b), 동일 수준으 로 cyanazine을 처리한 주요 농산물의 회수율을 확인하였다.
정량한계 (mg/kg) = [기기 정량한계(ng) / 주입량(μL)] × [시료용액(mL) / 시료량(g)]
추출 및 액-액 분배
농산물 시료 25 g에 아세톤 100 mL를 가하고(콩 및 현미 시료의 경우 추출 전 20 mL의 증류수를 가한 후 30분간 방 치하여 미리 습윤화 함) 호모게나이저 상에서 2분간 고속마쇄 추출하였다. 추출물을 여과지(Toyo No. 6, Japan)가 장착된 부흐너 여과기에서 감압여과하고 시료 및 호모게나이저 컵을 여분의 아세톤 40 mL로 씻고 여과액을 합하였다. 여과 추출 액을 1 L 용량의 분액깔대기로 옮기고 포화식염수 50 mL 및 증류수 450 mL를 첨가한 뒤 50 mL의 dichloromethane으로 2 회 분배 추출하였다. Dichloromethane 추출액을 무수 황산나 트륨으로 탈수한 후 40°C에서 감압 농축하였다. 현미와 콩을 제외한 나머지 시료는 감압농축 후 dichloromethane 10 mL에 용해하여 florisil 흡착 크로마토그래피에 공시하였고, 현미와 콩의 경우 미리 acetonitrile로 포화시킨 n-hexane 40 mL에 재 용해하여 250 mL 용량의 분액깔대기로 옮기고 n-hexane으로 포화시킨 acetonitrile 40 mL로 2회 분배 추출하였다. 합쳐친 acetonitrile 추출액을 40°C에서 감압 농축하고, 농축 후 건고물 을 10 mL의 dichloromethane으로 용해하여 florisil 흡착 크 로마토그래피에 공시하였다.
흡착크로마토그래피 정제
내경 1.5 cm 및 길이 40 cm의 유리칼럼에 미리 활성화시 켜 둔 florisil 10 g을 건식방법으로 충전하고, 그 위에 3 g 의 무수 황산나트륨을 추가로 충전하였다. 충전된 유리칼럼 에 50 mL의 n-hexane 용액을 첨가하여 흘린 후 상단에 소량의 n-hexane이 남을 정도로 유출시키고, 계속하여 10 mL의 dichloromethane에 용해된 시료액을 가하고 약 3 mL/min의 유속으로 유출시켰다. 충전제 표면이 노출되기 직 전 n-hexane/ethyl acetate 혼합용액(95/5, v/v) 150 mL를 용 출시켜 칼럼을 세척하고, 계속하여 n-hexane/ethyl acetate 혼 합용액(85/15, v/v) 150 mL로 cyanazine 성분을 회수하였으며, 40oC에서 감압 농축 및 건고하고, 농축수기에 잔류하는 잔류물 을 10 mL의 water/acetonitrile(60/40, v/v)에 용해하여 HPLCDAD로 분석하였다.
Cyanazine의 회수율 검증s
본 연구에서 확립된 cyanazine 분석법을 검증하기 위하여 실제 농산물 시료를 대상으로 회수율 검증 실험을 수행하였다. 마쇄 혹은 분쇄한 각 무농약 대표 농산물 시료 25 g에 정량한 계, 정량한계의 10배 및 50배에 해당하는 cyanazine 표준용액 을 3반복으로 인위 첨가한 후 상기의 분석과정을 수행하고 회 수율과 분석오차를 검증하였다.
결과 및 고찰
HPLC-DAD 분석조건
본 연구의 대상성분인 cyanazine의 HPLC-DAD 검출파장을 선정하기 위하여 메탄올에 용해된 5 mg/L의 표준품을 이용하 여 190~400 nm에서 최대흡수파장(λ max)을 조사하였다. 그 결과 cyanazine의 최대흡수파장은 220 nm에서 최대 흡광력을 나타내어 220 nm를 최적의 검출파장으로 선정하였다(Fig. 1). 분리용 HPLC column은 YMC-Pack Pro C18 RS(4.6 × 250 mm, 5 μm)를 이용하였으며, 이동상 용액은 water/acetonitrile (60/40, v/v) 혼합용액을 등용매용리(isocratic elution) 조건으로 사용하였고, cyanazine의 머무름시간은 11.1분 수준이었다.
Table 2의 HPLC-DAD 조건에서 cyanazine 표준용액의 S/ N(signal/noise) 비율을 검토한 결과 기기 정량한계(S/N≥10)는 1 ng 수준이었다. 한편, 기기분석의 안정성 및 분석 재현성 평 가를 위해 0.5 mg/L 농도의 cyanazine 표준용액을 10번 반복 주입하여 머무름시간 및 peak area의 변이계수(CV, %)를 조 사한 결과 두 크로마토그래피 척도 모두 최대 1.10% 미만의 오차범위를 나타내어 기기 분석시 안정적이고 재현성 있는 분 석을 수행할 수 있음을 확인하였다(Table 4). Fig. 2
한편, 0.05~5 mg/L 범위의 cyanazine 농도별 표준용액 20 μL를 HPLC에 주입하여 얻은 검량식의 회귀방정식은 y = 134.9198x-0.3724(R2=0.999**)로 우수한 직선성을 나타내었다 (Fig. 3). 이 결과는 cyanazine의 경우 기기 정량한계 수준인 1 ng에서 부터 그 100배에 해당하는 농도인 100 ng 까지 고 도의 직선성을 나타냄을 확인할 수 있고, 폭넓은 농도 범위의 cyanazine을 비례적으로 산출하는 것이 가능함을 확인하였다.
추출 및 액-액 분배
농산물 시료로부터 cyanazine을 추출하기 위한 용매로는 아 세톤을 사용하였고, 아세톤 추출 시 cyanazine과 함께 추출되 는 시료의 메트릭스 성분을 제거하기 위한 1차적 정제법으로 는 액-액 분배법을 사용하였고, 이 방법은 수용성 유기용매 추 출액을 다량의 포화식염수/증류수로 희석한 후 직접 비극성 용 매로 분배 추출하는 방법으로 번거로운 추출액의 농축과정을 생략할 수 있는 장점이 있다(AOAC, 2000;Lee et al., 2008). 액-액 분배의 용매로는 n-hexane, n-hexane/dichloromethane 혼합액 및 dichloromethane 등의 분배 용액을 공시하여 cyanazine의 분배효율을 조사하였다(Table 5). 대상 성분을 100 mL의 n-hexane 용액으로 분배하였을 때 회수율은 7.5% 수준이었으며, 100 mL의 n-hexane/dichloromethane 혼합액 (80/20, v/v)으로 분배하였을 때 회수율은 61.0% 수준, 100 mL의 n-hexane/dichloromethane 혼합액(20/80, v/v)으로 분배 하였을 때는 81.2%, 50 mL의 dichloromethane으로 연속하여 2회 반복 분배한 경우 회수율이 95.0% 수준을 나타내어 공시 된 분배조건 중 가장 우수한 회수율을 나타내었으며, cyanazine의 물리화학적 특성 중 하나인 log pow 값이 2.2로 극성이 다소 높은 편 양상임을 고려할 때 분배용매의 극성이 높아질수록 액-액 분배의 회수율이 높아지는 양상을 확인할 수 있었다.
Dichloromethane 액-액 분배과정으로 1차적 정제는 가능하 나 일부 시료 중에 포함된 유지 성분은 dichloromethane 층으 로 cyanazine과 함께 분배되기 때문에 제거되지 않을 것이다. 시료에 포함된 유지 성분은 기기분석 시 치명적 간섭, 분리용 column의 분리능 저하 및 기준선의 심각한 변화(baseline shift)를 초래하므로 반드시 제거해야 할 간섭대상 물질이다. 본 연구에서 사용된 시료 중 현미와 콩은 유지가 각각 1~3% 및 20% 수준 함유되어 있는 것으로 평가 되므로, 시료로부터 유래한 유지성분의 효율적 제거를 위하여 n-hexane/acetonitrile 분배법을 추가로 공시하였다(US FDA, 1999;AOAC, 2000). Table 6에 나타낸 바와 같이 미리 n-hexane으로 포화시킨 acetonitrile로 2회 분배하였을 때 cyanazine은 94.8% 수준으로 회수가 가능하였으며, n-hexane으로 포화시킨 acetonitrile로 3 회 분배하였을 때의 회수율은 94.0%를 나타내어 분배 횟수를 늘려도 회수율이 향상되지 않았으며, 이는 앞에서도 언급한 것 처럼 cyanazine의 log pow 값이 2.2로 극성이 다소 높은 편 임을 고려할 때 비극성 용매인 n-hexane 층으로의 분배는 비 교적 낮게 일어나고, 상대적으로 극성이 높은 acetonitrile 층으 로 분배가 크게 일어나므로, 2회만의 분배를 실시하여도 극성 용매인 acetonitrile 층으로 대부분의 cyanazine이 분배됨을 알 수 있으며, 작업의 편의성을 고려하여 유지 및 비극성 간섭물 질의 제거를 위한 n-hexane/acetonitrile 분배법은 2회 분배로 선정하였다. 한편, 시료에 함유된 유지성분의 함량이 0.1~0.4% 수준으로 평가되는 고추, 배추 및 사과에서는 제거되는 비극 성 유지 성분 및 불순물의 양이 매우 작고 크로마토그램 상에 서 그 정제 효과 또한 미미하므로 n-hexane/acetonitrile 분배 과정을 생략하였다.
흡착 크로마토그래피 정제
Cyanazine의 분석 시 상기 액-액 분배과정을 적용할 경우 대부분의 극성 불순물 및 비극성 간섭물질들이 제거될 것으로 판단되나, 농산물에 따라 시료 메트릭스로 부터 유래하는 다 양한 불순물이 존재할 수 있으므로 추가적 정제과정이 필요할 것으로 판단되어 흡착크로마토그래피에 의한 정제법을 추가 검토하였다. 본 연구에서는 florisil을 흡착제로 선정하여 용매 의 극성 조절을 통해 최적화 하였다(Table 7).5
용출용매의 극성 조절을 이용하여 cyanazine의 회수율을 검 토한 결과, 150 mL의 n-hexane/ethyl acetate 혼합액(95/5, v/ v)으로 florisil 칼럼을 세척한 후, 계속하여 150 mL의 nhexane/ ethyl acetate 혼합액(80/15, v/v)으로 용출할 경우 cyanazine의 회수율이 95.1%를 나타내었으며, 혼합액의 극성 을 높이기 위해 ethyl acetate의 비율을 높여도 회수율은 크게 향상되지 않았다.
Cyanazine의 정량한계 및 회수율 검증
Cyanazine 분석을 위해 확립된 시료 추출, 정제 및 기기분 석 과정을 무농약 대표 농산물 시료에 적용한 결과는 Fig. 4 와 같다. 무농약 농산물 시료용액에서 cyanazine과 동일한 머 무름시간을 나타내는 간섭물질은 존재하지 않았으므로, 분석 기기의 정량한계(LOQ)와 시료량, 그리고 분석과정 중의 농축 배율을 계상하여 분석법의 정량한계를 산출하였다. 본 연구에 서 무농약 대표 농산물 시료에서 간섭물질이 존재하지 않음을 확인한 후 산출된 cyanazine의 정량한계는 0.02 mg/kg이었으 며, 국제기준인 Codex Alimentarius Commission(Codex, 2003) 및 식품공전 잔류농약분석법 실무 해설서(Lee, 2017)에 서 권장하는 잔류농약분석법 기준인 0.05 mg/kg 이하 또는 허용기준의 1/2 이하의 정량한계 기준에 적합하였다.
대표 농산물 무처리 시료에 cyanazine 표준용액을 정량한계, 정량한계의 10배 및 50배의 농도가 되도록 인위 첨가하고, 확 립된 cyanazine 분석법을 이용하여 각 대표 농산물을 3반복으 로 분석하여 회수율을 조사한 결과, 정량한계 수준에서는 86.1~93.3%, 정량한계 10배 수준에서는 83.6~91.4%, 정량한계 50배 수준에서는 83.7~92.2%의 회수율을 나타내었고, 재현성 도 양호하여 분석오차는 최대 2.8%로 조사되었다. 따라서, cyanazine의 처리농도 및 농산물 시료의 종류에 관계없이 국 내 잔류분석기준인 회수율 70~120% 범위와 분석오차 10% 이내를 만족하였고, 아울러 농도별 국제 잔류분석기준(Lee, 2017) 또한 최소 회수율 70~110% 범위와 분석오차 10% 이 내도 만족하였다(Table 8).
LC/MS를 이용한 cyanazine의 재확인
본 실험에서 개발된 cyanazine 분석법의 신뢰성을 확보하기 위하여 LC/MS에 의한 재확인 과정을 추가하였다. LC/MS 분 석 시 분석대상 성분의 분자구조로부터 유도되는 분자이온과 주요 fragment ion을 확인함으로써 보다 신뢰성 있는 정성확 인이 가능하다는 장점이 있다(Kwon et al., 2008).
Cyanazine 성분은 이온화 향상을 위한 추가적인 시약의 첨 가 없이 acetonitrile 수용액의 이동상 용매에서도 이온화가 쉽 게 이루어져 HPLC-DAD 분석에 사용한 이동상 용매 조건을 그대로 LC/MS에 적용하였다. Fig. 5와 6에 나타낸 total-ion chromatogram (TIC) 및 mass spectrum으로부터 cyanazine은 electrospray ionization (ESI) positive ion 조건에서 용이하게 protonation 되어 [M+H]+를 형성하였고, cyanazine의 [M+H]+ peak가 base peak로 나타나므로 selected-ion monitoring (SIM)용 ion으로는 [M+H]+인 m/z=241.0 ion만을 이용하여도 정성적 확인이 가능하였다(Hwang et al., 2016).
Fig. 7은 본 실험에 사용된 농산물 시료 중 현미를 대상으 로 cyanazine의 잔류분을 재확인한 SIM 크로마토그램이며, 본 실험에 사용된 모든 대표 농산물의 무처리 시료에서는 cyanazine의 peak가 관찰되지 않았고, cyanazine이 인위 첨가 된 시료에서는 동일한 머무름 시간대에 정확하게 cyanazine의 잔류분을 확인할 수 있었다.
한편 본 실험에서 LC/MS 방법은 재확인 분석법으로 사용 하지만, 농도별 표준용액의 검량식의 직선성을 확인한 결과 0.001~5 mg/L 범위의 cyanazine 농도별 표준용액 5 μL를 HPLC/MS에 주입하여 얻은 검량식의 회귀방정식은 y= 629,711x + 47,780(R2=0.999**)로 역시 우수한 직선성을 나타내 는 것을 확인하였다. 따라서 본 연구에서 사용한 LC/MS의 SIM조건을 이용할 경우에도 HPLC-DAD를 이용한 정량법과 더불어 cyanazine 잔류분의 추가적 정량 혹은 정성분석법으로 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
적 요
본 연구는 HPLC-DAD/MS를 이용하여 농산물 중 triazine 계 제초제인 cyanazine의 잔류 분석법을 확립하였다. 대표 농 산물은 사과, 배추, 고추, 현미 및 콩을 선정하였고, 아세톤을 첨가하여 추출된 cyanazine 성분을 dichloromethane 액-액 분 배법과 florisil 흡착크로마토그래피법으로 정제하여 HPLCDAD/ MS 분석대상의 시료로 사용하였다. Cyanazine의 정량적 분석을 위한 최적 HPLC-DAD/MS 분석조건을 확립하였으며, 정량한계(LOQ)는 0.02 mg/kg 이었다. 각 대표 농산물에 대해 정량한계, 정량한계의 10배 및 50배 수준에서 회수율을 검토 한 결과, 모든 처리농도에서 83.6~93.3% 수준을 나타내었으며, 반복 간 변이계수(CV)는 최대 2.8%를 나타내어 잔류분석 기 준인 회수율 70~120% 및 분석오차 10% 이내를 충족시키는 만족한 결과를 도출하였고, 또한 LC/MS SIM을 이용하여 실 제 농산물 시료에 적용하여 재확인 하였다. 이상의 결과로 신 규 cyanazine의 HPLC-DAD/MS 분석법은 검출한계, 회수율 및 분석오차 면에서 국제적 분석기준을 만족하는 신뢰성이 확 보된 정량 분석법으로 사용 가능할 것이다.